液相色谱仪的注意事项有哪些呢？

一、样品制备与前处理

1. 样品纯度与过滤

• 避免杂质污染：样品需溶解，避免颗粒杂质（如结晶、悬浮物）堵塞进样阀或色谱柱。

• 液体样品需用 0.22 μm 或 0.45 μm 滤膜（水系 / 有机系对应流动相）过滤，固体样品需超声溶解后过滤。

• 浓度控制：进样浓度不宜过高（通常≤1 mg/mL），避免超出检测器线性范围或残留吸附在色谱柱上。

2. 溶剂兼容性

• 样品溶剂应与流动相互溶，避免使用与流动相冲突的溶剂（如流动相含缓冲盐时，样品溶剂不可为纯有机相，以防盐析出）。

• 避免使用高黏度溶剂（如甘油），以免增加进样压力或导致峰展宽。

二、流动相配制与管理

1. 试剂与水的纯度

• 流动相需使用色谱纯试剂（如甲醇、乙腈）和超纯水（18.2 MΩ?cm），避免杂质（如无机离子、有机物）污染色谱柱或产生鬼峰。

• 缓冲盐（如磷酸盐、醋酸铵）需现配现用，使用前用 0.45 μm 滤膜过滤，避免微生物滋生或盐结晶。

2. 脱气与混合

• 流动相必须脱气（超声脱气 10～15 分钟或在线脱气机），防止气泡进入系统导致基线波动、压力不稳或检测器信号异常。

• 梯度洗脱时，混合流动相应确保比例准确，避免因溶剂混合放热或体积变化影响流速精度。

3. 缓冲盐使用注意事项

• 含缓冲盐的流动相使用后，需先用低比例有机相（如水 - 甲醇 = 90:10）冲洗系统 30 分钟以上，再用纯有机相（甲醇 / 乙腈）封存色谱柱，防止盐析出堵塞管路。

• 避免流动相 pH 超出色谱柱耐受范围（常规 C18 柱 pH 2～8，宽 pH 柱可至 1～12），以防固定相流失或硅胶基质溶解。

三、仪器操作流程

1. 开机与系统平衡

• 开机顺序：先开泵、柱温箱，再开检测器，最后启动工作站；关机顺序相反，避免检测器长时间空载。

• 流动相更换后需平衡色谱柱（至少 30 分钟），直至基线稳定（压力波动≤0.5 MPa，紫外检测器基线漂移≤0.001 AU/h）。

2. 压力监控

• 实时关注系统压力：正常运行时压力应稳定，若压力突然升高，可能是色谱柱堵塞（如柱头污染）、管路堵塞或进样阀故障；

• 避免超压运行（超过色谱柱最高耐受压力，如常规柱 20～30 MPa），以防柱床塌陷或管路破裂。

3. 进样操作

• 手动进样时，注射器需先用样品溶剂清洗 3～5 次，进样时快速插入进样阀，避免气泡引入。

• 自动进样器需定期检查洗针液（常用 50% 甲醇水）是否充足，洗针管路是否堵塞，防止交叉污染。

四、色谱柱维护

1. 使用前处理

• 新色谱柱使用前需用流动相低流速（0.3～0.5 mL/min）平衡 1 小时，避免直接高流速冲击导致柱效下降。

• 连接色谱柱时，确保管路接口无漏液（PEEK 接头避免过度拧紧导致变形，不锈钢接头需用扳手适度拧紧）。

2. 使用后清洗与封存

• 常规反相柱（C18/C8）使用后：

• 水相流动相→用 10% 甲醇水冲洗 30 分钟→纯甲醇 / 乙腈冲洗 30 分钟封存（流速 0.8～1.0 mL/min）。

• 含缓冲盐流动相→先用 10% 甲醇水冲洗 45 分钟→纯有机相封存。

• 色谱柱长期不用时，需用纯有机相（甲醇 / 乙腈）封存，柱两端用堵头密封，避免干燥或微生物污染。

3. 禁忌操作

• 禁止反冲色谱柱（除非说明书允许），以免破坏柱床结构；禁止将水性流动相长期封存色谱柱（易滋生微生物）。

五、检测器维护

1. 紫外检测器（UV）

• 避免长时间使用波长低于 220 nm 的流动相（如甲醇在 205 nm 以下有紫外吸收），以防基线噪声增大。

• 定期清洗流通池（用 5% 硝酸水溶液或异丙醇冲洗），去除残留污染物，若出现基线漂移或鬼峰，可能是流通池污染。

2. 示差折光检测器（RID）

• 对温度敏感，需确保柱温箱和检测器温度稳定（波动≤0.1℃），避免流动相组成剧烈变化（如梯度洗脱）。

• 开机后需平衡至少 1 小时，避免空气泡进入流通池。

3. 荧光检测器（FLD）

• 避免强光直射样品池，防止荧光淬灭；流动相需严格脱气，气泡会导致荧光信号波动。

六、系统故障与安全防护

1. 常见故障排查

• 基线漂移：检查流动相是否污染、检测器是否老化或流通池有气泡。

• 峰形异常（拖尾 / 分叉）：可能是色谱柱污染（需再生或更换）、样品过载、流动相 pH 不合适或进样管路漏液。

• 保留时间漂移：流动相比例变化、柱温波动、色谱柱固定相流失或样品基质干扰。

2. 安全操作

• 有机流动相需在通风橱中操作，避免吸入挥发气体（如乙腈毒性较强）；高压管路禁止用手直接触碰，防止泄漏喷射伤人。

• 含强酸 / 强碱的流动相应佩戴手套操作，避免接触皮肤或腐蚀仪器部件。

七、日常维护计划

• 每日维护：清洗进样针、冲洗系统、记录压力与基线数据。

• 每周维护：检查泵密封圈（如有磨损需更换）、更换流动相储液瓶滤头（防止堵塞）。

• 每月维护：清洗自动进样器样品盘、检查检测器光源寿命（如 UV 灯使用时间≥2000 小时需更换）

液相色谱仪的简单介绍