高效液相色谱仪的每周保养细节

一、泵系统保养

1. 流动相管路与脱气机检查

• 管路清洁：用 10% 硝酸水溶液以 0.5mL/min 流速冲洗泵头及管路 30 分钟（去除金属离子或盐结晶残留），再用超纯水冲洗至中性，最后用甲醇 / 水（50:50）封存。

• 脱气机维护：观察脱气管路是否有气泡残留，若脱气效果下降，可更换脱气机膜（根据使用频率，通常每 3-6 个月更换一次）。

2. 泵头与密封垫保养

• 泵头冲洗：拆下泵头入口单向阀，用异丙醇超声清洗 15 分钟（去除阀球与阀座的杂质），安装前用甲醇润洗；若使用缓冲盐流动相，需重点检查泵头内是否有盐结晶（可用棉签蘸取超纯水擦拭）。

• 密封垫检查：观察泵密封垫是否有磨损痕迹（如漏液或压力波动增大时需更换），更换后需用甲醇以 0.5mL/min 流速运行 10 分钟，确保密封良好。

二、进样系统保养

1. 手动进样阀维护

• 转子与定子清洗：拆下进样阀转子，用乙醇棉球擦拭定子密封面（避免划伤），检查定量环是否有结晶或颗粒物（可用 10% 硝酸水溶液冲洗后再用超纯水洗净），安装时涂抹少量润滑脂（如 Vacuubrand 真空脂），防止磨损。

2. 自动进样器深度清洁

• 进样针与针座：用乙醇超声清洗进样针（10 分钟），去除残留样品；针座内部用细针通入乙醇冲洗，再用压缩空气吹干，避免交叉污染。

• 样品盘与洗针池：取出样品盘，用肥皂水擦拭表面污渍，洗针池更换新鲜洗针液（如甲醇 / 水 = 3:1），并清理池底沉淀的杂质。

三、色谱柱维护与性能验证

1. 色谱柱冲洗与封存

• 反相柱处理：若一周内使用过缓冲盐流动相，需先用 10% 甲醇 / 水以 0.5mL/min 流速冲洗 60 分钟，再用纯甲醇冲洗 30 分钟；长期不用时，用纯甲醇 / 乙腈（90:10）封存，两端加堵头并垂直存放。

• 正相柱处理：用正己烷以 0.5mL/min 流速冲洗 60 分钟，去除残留极性溶剂，防止固定相流失。

2. 柱效测试与记录

• 用甲苯（反相柱）或萘（正相柱）标准品进行柱效测试：

• 测试条件：5μL 进样，流速 1.0mL/min，柱温 30℃，UV 检测波长 254nm。

• 合格标准：理论塔板数（n）≥5000 / 米，对称因子（T）在 0.95-1.05 之间，记录测试图谱与数据，对比历史数据判断柱效衰减情况。

四、检测器保养

1. UV 检测器维护

• 流通池清洗：拆下流通池，用 10% 硝酸水溶液以 0.1mL/min 流速冲洗 30 分钟（去除蛋白或有机物沉积），再用超纯水→甲醇依次冲洗，安装后运行基线，直至噪声＜0.0005AU。

• 氘灯寿命监控：查看工作站记录的氘灯使用时间（通常寿命 2000 小时），若接近阈值需提前准备更换，避免影响检测灵敏度。

2. RID 检测器维护

• 温控系统检查：用温度计验证柱温箱实际温度与设定值的偏差（应≤±0.1℃），若波动较大，需校准温控模块或检查散热风扇是否正常。

• 流通池脱气：运行超纯水以 0.5mL/min 流速冲洗流通池 30 分钟，排除微小气泡，避免基线波动（RID 对气泡敏感）。

五、系统性能验证与记录

1. 压力稳定性测试

• 设定流速 1.0mL/min，运行纯甲醇 30 分钟，记录压力波动范围：正常情况下压力波动应＜10%，若波动超过 20%，需排查泵单向阀、密封垫或管路是否漏气。

2. 基线噪声与漂移测试

• 运行空白流动相 1 小时，UV 检测器在 254nm 处基线噪声应＜0.001AU，漂移＜0.01AU/h；若异常，需检查流动相纯度、检测器污染或电路干扰（如接地是否良好）。

3. 保养日志记录

• 详细记录本周保养内容，包括：

• 泵密封垫、进样阀转子的更换时间；

• 色谱柱测试的柱效数据与图谱编号；

• 检测器流通池的清洗步骤与效果；

• 任何异常现象及处理措施（如压力骤升时的冲洗方案）。

六、耗材与试剂管理

1. 耗材库存检查

• 清点滤膜（0.22μm/0.45μm）、注射器、进样针、泵密封垫等耗材的剩余量，按需补充，避免影响下周实验。

2. 流动相试剂更换

• 更换过期或污染的流动相（如超纯水建议每周更换一次），缓冲盐溶液需重新配制（超过 3 天易滋生微生物），有机相试剂检查是否吸水变质（如乙腈含水量＞0.5% 时需重蒸或更换）。

七、实验室环境维护

• 清洁仪器表面及周边区域，用无尘布蘸取乙醇擦拭仪器外壳，清除灰尘或溶剂残留；检查实验室温湿度（温度 20-25℃，湿度 40-60%），确保空调与除湿机正常运行，避免环境波动影响仪器稳定性。

总结

1. 泵与进样系统：防止盐结晶和样品残留导致的硬件损伤；

2. 色谱柱：通过标准化冲洗流程维持柱效，避免固定相流失；

3. 检测器：确保流通池洁净与温控精度，维持检测灵敏度。

使用高效液相色谱仪时需要注意的问题是什么？