猪伪狂犬病病毒gB抗体试剂盒（酶联免疫法）说明书
【产品名称】
通用名称：猪伪狂犬病病毒gB抗体ELISA检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：ELISA Kit For Swine Pseudorabies Virus gB Antibodies
【规格】
96 T×2
【预期用途】
用于检测猪血清样本中猪伪狂犬病病毒gB抗体。
【检验原理】
本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验 (ELISA )原理，由包被有猪伪狂犬gB VP1结构蛋白的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的PRV-gB-VP1-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+PRV-gB-VP1-Ab+酶标抗猪IgG抗体"复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与PRV-gB-VP1-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。
【主要成份】
1 | 抗原包被板 | 96 T×2 |
2 | 酶标记物 | 22 ml |
3 | 样本-稀释液 | 50 ml |
4 | 阴性对照血清 | 1.5 ml |
5 | 阳性对照血清 | 1.5 ml |
6 | 显色剂 | 12 ml×2 |
7 | 终止液 | 12 ml |
8 | 10×浓缩洗涤液 | 50 ml |
9 | 盖板膜 | 2张 |
10 | 说明书 | 1份 |
【自备器材】
1．酶标仪（双波长450/630 nm滤光片）
2．微量移液器（单道10-100 μl、0.5-10 μl、多道30-300 μl）
3．水浴箱或恒温箱
4．微量振荡器
5．一次性枪头（10 μl，200 μl）
6．去离子水
【样本要求】
1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2 ℃～8 ℃贮存应不超过一周，长期应在-20 ℃以下保存。
2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌的血清样本。
【实验准备】
1．试剂盒组分回温平衡: 试剂盒组分在实验前，先取出置室温30 min。酶标板应在室温中平衡至潮气干尽后方可拆开。
2．样本稀释：用试剂盒提供的样本-稀释液将样本作40倍稀释 （例：将5 μl样本加至195 μl样本-稀释液中）。
3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释10倍（例：将10 ml洗涤液加入90 ml去离子水中）。若10倍浓缩洗涤液出现结晶，属正常现象，放置37 ℃至溶解后即可。
【检验方法】
1. 加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入不用稀释的阴、阳性对照血清100 μl于相应孔中（可不设空白对照）。其余为样本孔，每孔加100 μl用样本-稀释液稀释好的样本。
2. 温育：加样后，盖上盖板膜，置37 ℃温育30 min。
3. 洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10 s，直接甩出，洗涤3次，最-后一次洗涤后吸干板内液体。
4. 加酶：每孔加酶标记物100 μl。
5. 温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37 ℃温育30 min。
6. 洗板：同步骤3。
7. 显色：每孔加显色剂100 μl，振荡混匀，37℃避光反应10min。
8. 终止：每孔加终止液50 μl，振荡10 s，充分混匀，终止后即读数。
9. 读数：以450 nm/630 nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。
【结果判定】
在酶标仪上测各孔的OD450/630值。试验成立的条件是阳性对照孔的平均OD值≥0.60，阴性对照孔的平均OD值＜0.40。
样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:
S/P=(样本OD450/630值－NCx)/（PCx－-NCx)，其中NCx表示阴性对照孔平均OD450/630值（0.05以下的数值按0.05计算），PCx表示阳性对照孔平均OD450/630值；
当样本的S/P≥0. 20时判为阳性；样品S/P值＜0.20时判为阴性；
【注意事项】
1. 请在使用试剂盒之前，仔细阅读说明书。
2. 请不要使用过期的试剂盒组分，不要将不同批次的组分混合使用。
3. 本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验废弃物应经121 ℃高压蒸汽灭菌30 min，或用5.0 g/L次氯酸钠等消毒剂处理30 min后废弃。
4. 未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封2 ℃-8 ℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2 ℃-8 ℃避光保存。
5. 应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。
6. 加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。
7. 终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。
【储存条件及有效期】
于2 ℃－8 ℃避光保存，防止冷冻，有效期12个月。
【生产日期及批号】
详见外包装盒
